高效液相色谱柱出现问题的解决办法！

一、柱压升高问题的解决

高效液相色谱柱在使用过程中最常见的问题是柱压升高。如果柱压是缓慢增加的，这属于正常现象，因为色谱柱会随着使用时间的增加而逐渐积累一些杂质。但如果柱压突然升高(排除系统管路堵塞及压力传感器故障)，以下是几种常见原因及相应的解决办法：

1、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染

解决方法：如果确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力。或者卸下色谱柱头，将其放在10%的稀硝酸中超声清洗10分钟，然后用纯水超声清洗10分钟，最后重新装入色谱柱。

2、色谱柱头的填料被样品污染

解决方法：如果确定色谱柱头的填料被污染，可以将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。

3、色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出

解决方法：如果确定是盐结晶，可以用10%的甲醇/水冲洗色谱柱，使柱内盐全部溶解，然后再换高浓度甲醇。

4、流动相pH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解

解决方法：如果因pH值使用不当导致固定相结构破坏或溶解，这种情况很难恢复。

二、色谱柱的八大注意事项

1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动：温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料。因此，在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。

2、逐渐改变溶剂的组成：特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。

3、一般说来色谱柱不能反冲：只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。

4、选择使用适宜的流动相：以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。

5、经常用强溶剂冲洗色谱柱：清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右。

6、保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇：柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。

7、色谱柱使用过程中，如果压力升高：一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。在后两种情况发生时，小心拧开柱接头，用洁净小钢将柱头填料取出1～2mm高度(注意把被污染填料取净)再把柱内填料整平。然后用适当溶剂湿润的固定相(与柱内相同)填满色谱柱，压平，再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善，但是很难恢复到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱(5～30mm)，可以起到保护、延长柱寿命的作用。采用保护柱会损失一定的柱效，这是值得的。通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料，只能在pH=2～9范围内使用。柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶，特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。

8、新的高效液相色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷：使柱效下降，这时也可补加填料使柱效恢复。每次工作完后，最好用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如，ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素(氟、氯、溴)的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用，应每隔4～5天开机冲洗15分钟。