液相色谱出现“双峰”如何处理？

有些用户在使用液相色谱柱时，由于对样品不了解或者处理不当，分析方法不合理，导致峰形异常，数据不准确，其中“双峰”就是最常见的问题。如果出现“双峰”，该如何处理呢？

什么是“双峰”？

“双峰”现象就是液相色谱中最常见的问题之一，明明是同一种物质，但在色谱图中却呈现2个峰值，实验人员会误认为有两种物质。

为何会出现“双峰”

出现色谱“双峰”的原因一般有以下几种：

一、色谱柱本身的问题

如果样品分析时发现每个色谱图都有“双峰”，尤其在分析单一纯物质时，那么基本可以断定色谱柱时出现问题了，受污染或者受损是最常见的，一般是柱头原因，被堵住或者污染了。

一般如果如果进样量少，原来色谱柱正常，形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这种情况可以判断为柱头受堵。解决方案是将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂冲洗堵在柱头的残留物。

如果发生峰拖尾，并且“双峰”强弱相差不大，就有可能是柱头固定相变脏或流失。使用者可以将进样头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料，不过这个不能经常用，容易损坏。

如果不是以上原因，则可能是柱塌陷造成的，这是就需要更换色谱柱了。

二、溶剂的问题

HPLC分析柱多为反相色谱，流动通常是甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。

最常用的溶解方法是用流动相溶解。在实际使用过程中，为了增强样品的溶解性或稳定性，会加入一些缓冲液，缓冲液中的酸碱性可能会导致样品转化，导致出现“双峰”。

可以通过更换缓冲液，调整溶剂pH值，用流动相配置样品来解决这一问题。

三、进样量的问题

纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇这类溶剂极性强度大的试剂，可能会导致“双峰”。

一般分析体系中以水为主，如果样品进样量大，单一的纯物质可能会出现“双峰”，一般第二峰比第一峰小。

这是因为样品的溶剂与流动相极性相差太大，流动相没有及时将溶剂进行稀释，这时此情需要减少进样量。

另外，进样量如果过大，色谱柱过载，也会出现“双峰”现象。

四、样品原因

不同的样品化学结构不同，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，会以动态平衡状态存在。

色谱分析时，在特定的条件下，参数在一定范围内，可能会出现“双峰”，并且“双峰”靠的很近，高度差不多，不拖尾，如果条件发生变化，尤其pH值变化，“双峰”就会消失，如红霉素等样品就有这类情况。

五、pH值

pH值对色谱“双峰”的影响出现在分析中的每个环节上，尤其在缓冲液流动相平衡中。

当连续进样时，受pH的连续变化影响，经常会出现“双峰”的情况。

深圳市恒谱生科学仪器有限公司儿建议使用者在进行样品分析时，流动相的pH要尽量远离被分析物的等电点，不然也可能导致“双峰”产生。

“双峰”是液相色谱柱使用时经常出现的场景，了解其产生原因并及时处理，可以有效延长液相色谱柱使用寿命。

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